分光光度計就是利用分光光度法對物質進行定量定性分析的儀器,分光光度法是通過測定被測物質在特定波長處或一定波長範圍內光的吸收度,對該物質進行定性和定量分析。
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- 可見光分光光度計:測定波長範圍爲400~760 nm的可見光區;
- 紫外分光光度計:測定波長範圍爲200~400nm的紫外光區;
- 紅外分光光度計:測定波長範圍爲大於760nm的紅外光區;
- 熒光光度計:用於掃描液相熒光標記物所發出的熒光光譜;
- 原子吸收分光光度計:光源發出被測的特征光譜輻射,被經過原子化器後的樣品蒸氣中的待測元素基態原子所吸收,通過測定特征輻射被吸收的大小,來求出被測元素的含量。
分析原理是利用可見光及紫外光之燈管 (Lamp) 做為光源,通過濾光鏡調整色調後,經聚焦後通過單色光分光稜鏡,再經過狹縫選擇波長,使成單一且特定波長之光線,而後射入樣品管中之水樣中,最後射入光電管中將光能轉換為電器訊號,藉由樣本及空白水樣間所吸收之光能量差,與標準液之能量吸收值相比較,便可律定樣本中之待測物濃度。
核酸的定量
核酸的定量是分光光度計使用頻率最高的功能。可以定量溶於緩衝液的寡核苷酸,單鏈、雙鏈DNA,以及RNA。核酸的最高吸收峰的吸收波長260 nm。
蛋白質的直接定量(UV法)
這種方法是在280nm波長,直接測試蛋白。選擇Warburg 公式,光度計可以直接顯示出樣品的濃度,或者是選擇相應的換算方法,將吸光值轉換為樣品濃度。
比色法蛋白質定量
蛋白質通常是多種蛋白質的混合物,比色法測定的基礎是蛋白質構成成分:氨基酸(如酪氨酸,絲氨酸)與外加的顯色基團或者染料反應,產生有色物質。有色物質的濃度與蛋白質反應的氨基酸數目直接相關,從而反應蛋白質濃度。
比色方法
一般有BCA,Bradford,Lowry 等幾種方法。
細菌細胞密度(OD 600)
OD600是追蹤液體培養物中微生物生長的標準方法。以未加菌液的培養液作為空白液,之後定量培養後的含菌培養液。
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